检测猪圆环病毒2抗体的ELISA方法的建立

检测猪圆环病毒2抗体的ELISA方法的建立(10100字)
摘  要：目的：建立一种具有较高的敏感性和特异性的检测PCV2抗体的间接ELISA方法。方法：采集屠宰场的屠宰猪的血清，采用间接ELISA方法检测，并在酶标仪处理系统上观察结果,最后对检测结果进行比较分析，确定建立间接ELISA方法的最佳条件。结果：利用重组Cap蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化, 建立了有效的间接ELISA方法用于检测猪圆环病毒2型抗体。
关键词：PCV2；猪圆环病；间接ELISA；建立

Development of a indirect ELISA for the detection of antibodies against Porcine circovirus type 2
Abstract: Aim：Established a indirect ELISA which has fairly good specificity and sensitivity for the detection of antibodies against Porcine circovirus type 2.Method: We collected serum slaughterhouse slaughtering pigs detected by indirect ELISA and Micro plate handing system, observations and finally analyze the test results to determine the method and establish the best conditions for an indirect ELISA. Results: This experiment has used purified and fused protein as diagnostic antigens, through the process optimization, developed a effective indirect ELISA for the detection of antibodies against Porcine circovirus type 2.      
Key words: PCV2; Porcine circovirus; Indirect ELISA; Development 
 

目    录
摘要…………………………………………………………………………1
关键词………………………………………………………………………1
1 前言 …………………………………………………………………………2
1.1 病原特征……………………………………………………………………2
1.2 PCV2的流行情况‥……………………………………………………… 2
1.3 致病机理  …………………………………………………………………3
1.4 传播途径……………………………………………………………………3
1.5 临床症状和病理变化………………………………………………………4
    1.5.1 断奶仔猪多系统衰竭综合症………………………………………4
    1.5.2 传染性仔猪先天震颤………………………………………………5
    1.5.3 猪皮炎肾炎综合症…………………………………………………5
2材料和方法……………………………………………………………………6
    2.1材料……………………………………………………………………6
        2.1.1血清样品……………………………………………………………6
        2.1.2 试剂…………………………………………………………………6
2.1.3 主要实验用仪器……………………………………………………6
    2.2检测猪圆环病毒2抗体的间接Elisa方法的建立……………………6
2.2.1 抗原包被浓度和血清稀释浓度的选择……………………………6
2.2.2 抗原包被条件的选择………………………………………………6
2.2.3 封闭条件的选择……………………………………………………7
2.2.4 血清稀释液的条件优化……………………………………………7
2.2.5 血清作用时间的选择………………………………………………7
2.2.6 酶标二抗作用条件的确定…………………………………………7
2.2.7 底物作用条件的选择………………………………………………7
2.2.8 终止液的选择………………………………………………………7
2.2.9 判定标准的确定……………………………………………………8
2.3 交叉反应试验………………………………………………………………8
2.4 重复性试验…………………………………………………………………8
2.5 与韩国金诺公司PCV 2抗体ELISA试剂盒比较 ………………………8
3 结果分析……………………………………………………………………………8
3.1 检测猪圆环病毒2抗体的间接Elisa方法的确定………………………8
    3.1.1 抗原包被浓度和血清稀释浓度的选择……………………………8
    3.1.2 抗原包被条件的确定………………………………………………9
    3.1.3 封闭条件的确定……………………………………………………9
    3.1.4 血清稀释液条件的确定……………………………………………9
    3.1.5 血清作用时间的确定 ……………………………………………10
    3.1.6 酶标二抗作用条件的确定 ………………………………………10
    3.1.7 底物作用条件的确定 ……………………………………………11
    3.1.8 终止液的确定 ……………………………………………………11
    3.1.9 判定标准的确定 …………………………………………………12
3.2 交叉反应实验结果 ………………………………………………………12
3.3 重复性试验结果 …………………………………………………………12
3.4 与韩国金诺公司PCV2抗体ELISA试剂盒比较结果……………………12
4 讨论 ………………………………………………………………………………12
5结论…………………………………………………………………………13
参考文献………………………………………………………………………13
致谢……………………………………………………………………………14