猪大肠杆菌的分离鉴定

猪大肠杆菌的分离鉴定(8200字)
ISOIATION AND IDENTIFICATION OF ESCHERICHIA COLI IN PIG
本研究利用麦康凯琼脂平板直接接种病猪的粪便和肛拭子，在30份病料中共分离到大肠杆菌25株，分离率为83.3%。按常理，粪便中一定会有大肠杆菌存在，分离率应为100%，但本研究结果偏低，这可能是由于在细菌纯培养时，挑选的单个菌落不是大肠杆菌。因为，不能排除粪便在麦康凯平板上的培养物里没有其它细菌的生长。另外，本研究利用小鼠攻毒试验，很快把具有致病性的菌株和非致病性的菌株区分开来，并从致死的小鼠的心血里重新分离到相应的菌株，这种从心血分离的细菌一定是致病性的，并且其纯度更高。因为最终要得到的是致病性大肠杆菌，我们把以上的方法作了一些改进，在临床上摸索出一套快速分离大肠杆菌的方法。即取患黄白痢的仔猪的粪便1-1.5g，加入生理盐水5mL，充分混匀，低速离心，取上悬液0.2mL腹腔注射小白鼠，然后打开小鼠的心脏，挑取心血划线接种平板，24h生长的菌落就是我们所要分离的菌株。
本研究中为了检测水肿病病料中分离的大肠杆菌是否产生SLT-IIv毒素，设计了一对引物进行了检测，并且摸出了在本实验室条件下检测此毒素基因的最佳条件，扩增的特异性强，敏感性高。由于本试验是为了检测SLT-IIv的存在，没有进一步研究是否能从临床病 料中直接扩增出该片段。本研究致水肿病菌株是分离自发生水肿病仔猪的胃大弯的水肿渗出液，而SLT-IIv是致水肿病的罪魁祸首，如果能够进一步的探讨并优化条件，力争能在水肿渗出液或粪便当中直接扩增出该毒素，将可以建立一种水肿病的PCR检测方法。